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2138acom太阳集团:麦氏比浊管热卖中

作者:仪器仪表    来源:未知    发布时间:2019-11-27 05:28    浏览量:

麦氏比浊管热卖中在微生物学中,通过比对溶液浊度,麦氏比浊管常用来校对细菌悬浮液至某个特定浓度。例如在医药学领域常见的微生物抗药物敏感性试验中,用来测量最小抑菌浓度。最初的麦氏比浊管是通过混合特定浓度的氯化钡和硫酸,从而形成硫酸钡悬浮液。例如0.5号麦氏比浊管是由0.05毫升1%氯化钡溶液加9.95毫升1 %硫酸制成。现在也有由乳胶粒子悬浮液制成的麦氏比浊管,与传统的麦氏比浊管相比,保存时间更长也更稳定。1、 轻摇标准试管。2、 无菌操作将被测定的肉汤培养物加到与标准管相同直径的无菌试管中。3、 以无菌操作向被测定试管加入无菌蒸馏水,直到浓度与所要求的标准管的浓度相同。【计算被测培养物试管的浓度】:1、0.5号麦氏浊度标准管约相当于1.5×10^8个细菌/ml。2、1.0号麦氏浊度标准管约相当于3×10^8个细菌/ml。3、细菌浓度标准管号×3×10^8=该管号的细菌数/ml。3、如果是酵母。相应的数值要除以30。【制备所要求的浓度,如需要10^5细菌的浓度】:1、相当1.0号麦氏浊度标准管(3×10^8)的细菌作1:3稀释到10^8。2、再作1:1000稀释。为1×10^5个细菌/ml。3、10^8÷10^5=10^3:A1、若有大颗粒出现,此标准管应更换。2、该比浊管仅用于微生物检验中,生化试验的细菌数量估算,不可用于精密定量。3、该玻璃管和盖子可以高压灭菌、可以重复使用。4、标准无菌生理盐水管仅用于空白对照,请勿用于配制样品管。B1、如果测定的肉汤培养物不澄清,则由培养物的值减去未接种培养基的值来校正细菌浓度。例: 4号管-1号管(孵育过的未接种的肉汤管)=3号管2、如果肉汤颜色很深,把未接种试管放在标准管的后面读数即可。

1.2.微量肉汤稀释法

核心提示:1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备 抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml或10倍于最高测定浓度。溶

1.2.1.抗菌药物和培养基制备 同常量肉汤稀释法。

1.1.6.孵育 将接种好的稀释管塞好塞子,置35℃普通空气孵箱中孵育16~20h;嗜血杆菌和链球菌在普通空气孵箱中孵育20~24h;对可能的耐甲氧西林葡萄球菌和耐万古霉素肠球菌应持续孵育满24h。

1.2.3.接种物制备 将用生长法或直接菌悬液法制备的浓度相当于0.5麦氏比浊标准的菌悬液,经MH肉汤1∶1000稀释后,向每孔中加100μl,密封后置35℃普通空气孵箱中,孵育16~20h判断结果。当试验嗜血杆菌属,链球菌属时,孵育时间为20~24h,试验葡萄球菌和肠球菌对苯唑西林和万古霉素的药敏试验时孵育时间必须满24h。此时,第1孔至第11孔药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125μg/ml。

3.3.孵育时间和温度 同纸片扩散法。

3.4.结果阅读 孵育后围绕试条可形成一个椭圆形的抑菌圈,在抑菌圈和试条的横切相交处试条上的读数刻度即是测定抗菌药物对受试菌的MIC。阅读时应注意的问题见供应商的产品说明书。

3.E试验 E试验是指浓度梯度琼脂扩散试验,其原理基本同扩散法,即浓度呈连续梯度的抗菌药物从塑料试条中向琼脂中扩散,在试条周围抑菌浓度范围内受试菌的生长被抑制,从而形成透明的抑菌圈。E试验综合了稀释法和扩散法的原理和特点,同时还弥补了二者的一些不足,可以像稀释法一样直接定量测出抗菌药物对受试菌的MIC。

1.1.4.接种物的制备 有2种方法配制接种物,一是细菌生长方法,用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个,接种于4-5ml的水解酪蛋白肉汤中,35℃孵育2-6h。增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准,约含1~2×108CFU/ml。二是直接菌落悬液配制法,对某些苛养菌,如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株,推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。用MH肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后备用。注意应在15分钟内接种完配制好的接种物,并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养,以检查接种物纯度。

1.2.2.MIC板制备 无菌操作,将倍比稀释后不同浓度的抗菌药物溶液分别加到灭菌的96孔聚苯乙烯板中,第1至第11孔加药液,每孔10μl,第12孔不加药作为生长对照,冰冻干燥后密封,-20℃以下保存备用。

1.1.常量肉汤稀释法

1.1.3. 培养基 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton肉汤,pH7.2~7.4。需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时,应在肉汤中加入2%氯化钠,按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤,肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。

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